猪冻精厂家

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猪冻精液质量影响因素

2019-07-04

人工授精是现代生物技术的一种,可以充沛发挥公畜的遗传潜力,而精液冷冻是人工授精的重要环节,为人工授精提供了精子库。但是,人工授精要保证精液在冷冻之后的受精才能。猪冻精液质量遭到冷冻前处置、稀释液、冷冻维护剂、 冻结等各方面的影响。在冷冻之后,猪冷冻精液的细胞构造很可能发作改动精子的质膜完好性,精子生机和发育才能远远低于鲜活精子,因而猪精液冷冻技术要选用适宜的稀释液和糖类,防止精子在冷冻过程主动构成冰晶,进而进步精子的活率,降低冷冻技术对精子质膜和顶体的影响。研讨猪冷冻精液质量影响要素不只可以优化精液冷冻技术,而且对人工授精的开展有着深入的理想意义。
1 精液冷冻的过程
1.1 降温

精液在冷冻的过程中需求降温处置,降温主要指精液温度从体温降低到冰点温度。而精液降温需求渡过一定的风险温区,降温过程对精子的影响十分大,这种影响被称为低温打击。并且精子在冻结的过程中需求从冰点温度恢复到体温,而这个过程也需求经过风险温区,温度的变化会招致精子的生机降落。详细来说,低温打击会损伤精子的代谢功用和精子的细胞膜,由于在降温过程中,精子的细胞膜构造发作了变化。 温度降低会招致细胞膜中的磷脂类物质转移到温度较高的中央,精液从结晶状态转为凝胶状态,进而招致细胞膜构造发作变化。在冻结的过程中,磷脂类物质的转移会诱发精子顶体膜与细胞膜的分离,进而改动精子细胞四周的蛋白质环境,影响精子细胞蛋白质的活性。另外,低温打击还会影响精子细胞的其他功用,例如低温打击会损伤精子顶体膜,降低细胞膜的通透性。

猪冻精

1.2 冷冻与细胞损伤
在冷冻精液的过程中,当温度降低到零下 5℃时,精子细胞内外的水分处于过冷状态而不会构成结晶。而随着温度的 降低,当温度降低到零下  10℃时,精子细胞外部的水分会构成结晶,而精子细胞内部的水分也开端固化。而冰晶会产活力 械性刺激,损伤精子细胞的固有构造。当温度降至在零下5℃~10℃之间时,冰晶会构成在精子细胞外面的电解质当中,细 胞内的水分仍处于过冷状态,但是从精子细胞脱水的角度来说,精子冷冻过程中的细胞降温速度必需非常迟缓,允许精子细胞脱水的完整发作,进而防止精子细胞内部水分的固化。速度足够快的精子细胞脱水可以防止精子细胞处于高渗环境, 而脱水严重会招致细胞分子的极端收缩,损伤精子。另外精子细胞外部水分构成冰晶之后会减少精子细胞的空间,对精子细胞形成机械性伤害,这种机械性伤害无法补偿。除此之外, 在冷冻的过程中需求在精液稀释液中添加冷冻维护物质,防止精子细胞内冰晶的构成。常用的冷冻维护物质是甘油,甘油的浸透性较强,可以降低精子细胞内水分的含量能够渗入到精子细胞内,调理精子细胞由脱水而产生的浸透压变化。
2 精液稀释液中的添加剂
为进步精子在冷冻之后的受精才能,相关人员对精子冷 冻技术停止了深化研讨。在大量的研讨中,相关人员发现某些  物质可进步精子在冷冻后的运动才能,延长精子冻结后的生 存时间,使精子在输卵管内运动,进步授精率,因而在冷冻精  子的过程中,技术人员常在精液稀释液中添加可以进步精子 生机、延缓精子衰老的物质,这些物质主要包括咖啡因、氨基 多糖、己酮可可碱、细胞因子、维生素等。
2.1 咖啡因
处置精子的过程中,在精液稀释液中参加咖啡因可以有效进步冻结之后,精子的体外受精率和精子的生机。在冻结精子停止体外受精的过程中,需求应用流式细胞仪对精子实行 细胞别离,在这个过程中,咖啡因可以有效保证体外受精。因  为咖啡因可以抑止精子细胞中的磷酸二酯酶的活性,进步精 子内的 cAMP 浓度,促进精子顶体反响发作,进而完成体外受精。但是,咖啡因会影响受精卵的早期发育,因而在受精卵形  成之后需求采用离心方式去掉受精卵中的咖啡因,保证受精 卵安康发育。
2.2 氨基多糖类
一是肝素经常用于诱导动物精子体外获能,肝素与精子分离可以使钙离子进入精子细胞内,进而促进精子的顶体反响,进步精子的受精率;二是透明质酸属于现行大分子多糖物质,能惹起动物精子顶体反响和动物精子获能。透明质酸存在于雌性动物的生殖道内,促进体内受精。在处置体外受精的过程中,在精液稀释液中参加透明质酸可以进步精子的存活率。
 
2.3 己酮可可碱
己酮可可碱是当前生物技术行业非常注重的精子体外处 理剂,能有效加强冻结后的精子生机,改善冻结后质量较差的 精子。己酮可可碱在体外受精技术中应用非常普遍,效果较好。己酮可可碱不只能影响精子的顶体反响和运用才能,而且 能刺激精子的运动,使精子在一段时间后仍坚持被刺激的运动。另外,己酮可可碱能加强精子的受精神,进步体外受精的几率。
2.4 生殖激素
在精液稀释液中参加生殖激素可有效进步精子的受精几率,孕酮可以诱发精子的顶体反响。孕酮使精液中的钙离子流 进精子内部而发作顶体反响。另外,研讨发现,浓度恰当的孕 酮加强精子的穿卵才能,进步人工授精的胜利率。
2.5 细胞因子
血小板活化因子被普遍运用于生物学,是一种活性较强的甘油磷脂,与哺乳动物的排卵、受精、胚胎发育、分娩等生 殖过程有着亲密联络。血小板活化因子与磷脂相关,可以诱导 精子发作顶体反响,进步卵细胞的体外受精率,并且血小板活 化因子可以进步精子的运动速度,加强精子生机。

3 猪冷冻精液质量的影响要素
3.1 稀释液与冷冻维护剂的影响
稀释液是精子在冷冻过程中的维护剂,决议了精液的冷冻效果即猪冻精稀释液。常用的精液稀释液主要由糖、脂质、蛋白质、添加剂、 缓冲液、防冻剂等成分组成。而常见的稀释液主要包括甘油、 卵黄、糖类弛缓冲物质及其他添加物质等。其中甘油是重要的冷冻维护剂,可以深化精子细胞内部,分离或浓缩精子细胞内部的水分。甘油也有一定的稀释作用,能降低稀释液中的浓度,减小冷冻液的浸透压,进而维护处于低温的精子。但甘油对精子也有一定的负面作用,甘油的浓度、温度等对猪精子在冷冻之后的存活率有着重要影响,需求冷冻技术人员合理把握添加甘油的机遇和甘油的浓度。卵黄可以有效维持精子的生机,充沛维护精子的顶体膜。卵黄的浸透性弛缓冲性较强, 能使精子接受高渗和低渗。在冷冻技术中,稀释液中的卵黄浓度约为 20%左右。精液稀释液中的糖类物质主要有果糖、葡萄糖和乳糖,糖类物质能应用本身的浸透性维护细胞,抵御低温。但高浓度的糖类物质会低效甘油对精子顶体的伤害,进步精子的生机。另外,葡萄糖在精液稀释液中的维护效果很好。 其他添加物质主要包括 HA、HBCD、OEP 等物质。HBCD 能增加冻结后精子的运动速度,HA 能加强精子脂质膜的稳定性。
3.2 冷冻前处置影响
猪精子在疾速冷却时会失去生机,当精液在采集之后疾速冷却到 5℃或 0℃时,会失去生机,这种现象被称为冷休克。猪精子对冷休克非常敏感,需求在冷冻行进行处置。猪精子在用低倍数稀释液稀释并迟缓降温 1~5 小时之后,才具备一定的抗冻才能。猪精液冷冻需求数个小时,均衡在 15℃以上,才干够保证精液在冷冻之后具备受精才能。
3.3 冷冻剂影响
一是安瓿瓶法。安瓿瓶法主要运用硅酸盐硬质玻璃支撑的容器盛装猪精液,计量为 0.5 毫升或 1.0 毫升。从 20 世纪50 年代开端,猪精液冷冻便开端采用安瓿瓶法。安瓿瓶法的优点是剂量规范、密封性强、标志明显,不需求运用冻结溶液精子的复苏率较高,但是安瓿瓶法也有与一定的缺陷,制造本钱较高,容易决裂,体积较大。目前,猪精液冷冻曾经很少运用安瓿瓶法;二是颗粒冷冻法。颗粒冷冻法主要指将经过预处置的猪精液滴入干冰内,进而使猪精液快速冷冻。目前,颗粒冷冻法在猪精液冷冻保管中的应用非常普遍。颗粒冷冻法主要包括快速制冻法弛缓慢制冻法;三是细管法。细管法主要将稀释之后的猪精液装入大型细管之中,并将细管密封放在液氮上冷冻。运用细管法冷冻之后的猪精子在冻结之后的存活率低于颗粒法,但是细管法冷冻的猪精子受胎率高于颗粒法。 细管法的体积较小,容易寄存,精子应用率也高,在精液冷冻保管中应用比拟普遍;四是铝箔袋法。铝箔袋法主要将经过两次稀释之后的猪精液放入铝箔袋内,封印并用液氮蒸汽冷冻。 
3.4  冷冻速率影响
在冷冻过程中,猪精子细胞不只要接受保管温度,还要承 受温度的变化。猪精子细胞有其理想的冻结和冷冻速率,假如  冷冻速率太慢,猪精子与冷冻维护剂接触的时间过长,会招致  猪精子易遭到冷冻维护剂的毁坏而死亡。但是,假如冷冻速率 过快,猪精子细胞在冷冻的过程中会产生细胞内液体结晶现 象,对猪精子细胞形成化学或物理损伤。
3.5 冻结影响
精子细胞在冷冻过程中需求禁受温度的应战,忍耐致死温度区,而精子细胞在冻结过程中还需求承受温度的应战,阅历致死温度区,而且不同细胞的冻结速率不同。含有精子的冷冻液冷冻到冰点左右时,冷冻液会结冰,但是精子内部的物质并不一定会结冰。精子内部的膜质会与阻碍冰晶的扩张,招致液体在精子细胞内外活动。当温度降落时,过冷的精子细胞水分会遭到细胞外的浸透压力渗出精子细胞外。精子细胞水分的浸透率会遭到细胞要素的影响,特别是特定温度下精子细胞膜对甘油和水的浸透率的影响。精子细胞冷冻技术应用外部要素来调理细胞水分浸透的办法是经过控制猪精液冷冻速率或添加冷冻维护剂完成的。假如冷冻速率够慢,精子可以经过细胞外部的浸透压力来减少精子细胞内部的水分,防止精子细胞内部大冰晶的构成。假如冷冻速率过快,精子细胞内部的水分将无法渗出,产生大冰晶。另外,假如冻结速率过慢, 猪精子与冻结液的接触时间过长而遭到冻结液毁坏,假如冻结速率过快,猪精液很容易呈现没有完整冻结的现象,从而影响猪精子的生机。


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